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第八十七章 分离曲霉菌 寻找青霉菌

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三天后,雷云的住处客厅内,一众学生站立在两旁,雷云正在给他们安排任务。当然,公子昂,苏秦,白冰,廖姜,郑姬,也都在一旁蹭课上。

“今天我首先要给你们们一个概念,为什么咱们可以用粮食酿酒?”

“答案是细菌在作用,我告诉你们,细菌这个东西有好有坏,比如说咱们用来酿酒的酒曲,其实就是培养出来的一些发酵的酶和细菌群,但是他们是对咱们是有用处的,也就是有有益了。”

“但是有好,就有坏,比如说革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌。什么是革兰氏染色法?这个以后再说,等一件东西到了我再教你们。”

“这里我要说大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌,比如说士兵外伤之后感染流脓,就是它们干的,它们能产生外毒素使人致病,而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌,它们产生内毒素,毒素被人体肠道吸收就致病。”

“而咱们用来发酵谷氨酸的谷氨酸棒状杆菌,氨基酸发酵工业生产的主要生产菌,但它也是革兰氏阳性菌的一种。谷氨酸棒状杆菌严格好氧,不运动,不产生孢子,生物素营养缺陷型。问题是咱们现在没有这样的菌类,那么咱们只能自己培养。”

“其实要说培养这样的细菌有点恶心,因为它的发现是从大肠杆菌而来的,而大肠杆菌属于革兰氏阴性菌,大肠杆菌主要生存环境是人体的肠道。”

“有一天,一个化学高手,在培养基中以大肠杆菌为主要细菌,加入碳源和氮源,也就是加入葡萄糖和尿素,经过一段时间的培养,结果他发现大肠杆菌开始摄取了碳源和氮源之后,不在分泌有毒物质,而是分泌一种叫谷氨酸的物质了。”

“于是人们以此为线索,尝试不同的细菌,最后发现以革兰氏阳性菌在提供氮源和碳源之后,经过培养分离,最后能诱导细菌变异,成为需要的谷氨酸棒状杆菌。”

“这就是我给你们的第一个任务,培养出谷氨酸棒状杆菌。”

但是这个任务有点恶心,需要用这些玻璃碟,做出培养基,然后在人的排泄物中取一些菌种放到培养基里培养,当然,这是用竹签沾一点点,然后在培养基里点几下就可以了。

“先生,此法确实有点恶心了,魏嗣突然想到了一件事,先生在打中山国的几个人的时候说去中山国王宫的大门上抹屎,是不是从这个细菌培养来的?”

“魏嗣,你是不是想挨揍了?这个细菌培养的事情就交给你来做了。”

“啊。。。。。。。”

“公子,这也太恶心了把,咱们发酵谷氨酸居然要从。。。。。。。”

“是啊大哥,这谷氨酸棒状杆菌,居然要从如此恶心的东西里得到。。。。不行我有点反胃了。”

“廖姜,白冰,其实要找这一类菌株,也有别的办法,但是差异不大,不是人的粪便,就是外伤化脓的伤口,这个也是没办法的事情。因为这些提取环境相对纯净一些,如果到自然条件下提取,那么取得的菌群相对就复杂了,给培养获取造成困难。”

“算了说第二个任务把。”

“当然第二个任务好一点,目前咱们生产葡萄糖,消耗硫酸太大,虽然目前上郡可以生产硫酸,但是运输不易,这玩意很危险,所以我准备将制造工艺升级一下。糖化酶发酵淀粉来生产葡萄糖。”

“糖化酶又称葡萄糖淀粉酶,糖化酶是一种习惯上的名称,学名为α-1,4-葡萄糖水解酶。生产酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、柠檬酸、啤酒等工业以及白酒、黄酒都能用上。”

“但糖化酶是由曲霉菌种经深层发酵提炼而成。而曲霉目前我知道的就有60种,所以也要从中间选出需要的菌种,也需要培养。”

“你们也许会问曲霉从何而来?其实曲霉的来源很简单,咱们的酒坊用的酿酒的酒曲,就是曲霉。此外曲霉还用于制酱肉,白冰就用制造肉酱的方法做出了酱油,当然,咱们也可以用它和黄豆来制酱,它是酿酒、制醋粬的主要菌种。但是这并不是他唯一的用途。”

“咱们可以它利用曲霉生产各种酶制剂,如淀粉酶、蛋白酶、果胶酶等、有机酸如柠檬酸、葡萄糖酸、五倍子酸等等。”

“但是你们记住,曲霉广泛分布在五谷、空气、土壤和各种有机物品上。生长在剩饭菜的曲霉仅仅一两天就会长出菌丝,肉眼就可见了,有的能产生对人体有害的真菌毒素,如黄曲霉毒素能导致癌症,有的则引起水果、蔬菜、粮食霉腐。”

“咱们要得到的是有用的曲霉而避免这些有害的毒素菌株。因此,必须将曲霉进行有效的分离,培养,比如说,可用于产生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶的黄曲霉。”

“这里并不是说黄曲霉菌就无害,而是看它吃什么东西,它分解一些东西,能产生毒素,但是我们不给它这些能让它产生有害物质的原料,而是给它能产生我们需要的物质的原料,那么促使它变异,它就是有益的。”

“再比如说可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等的黑曲霉。”

“黄曲霉,黑曲霉这些都是有益的,但是在曲霉中往往还有有害的烟曲霉。培养筛选的时候菌丝要把有害的烟曲霉分离出来,从而得到有用的黄曲霉,黑曲霉等等。”

“再把黄曲霉,黑曲霉等有益菌种,进行深层次的长时间的发酵,便可得到糖化酶。”

“也就是说,我在酒坊让他们制曲,是要得到尽可能多的有益曲霉菌群,而此时,就是让你们从众多的曲霉菌群中分离出单一的菌种。”

“比如说,咱们可以用豆腐,加一点酒曲进去,过一两天,它就会霉变,那么菌丝在霉变开始生长的时候,会有不同的颜色,比如说,黄色,黑色,白色,绿色,这个时候,咱们就用竹签仔细的分离这些颜色的菌丝,然后植入新鲜的豆腐块上,让其生长。”

“这样反复的培植,最后就能得到颜色单一,质地越来越纯的菌群从而将有害菌去掉,让有益菌的纯度越来越高,最后咱们干燥,制粉,保存,需要的时候把各种需要的菌种加入呆发酵的原料中,从而得到想要的产品。”

“大哥,这个我可否参与,我会做酱油,做酱,也会酿酒,酿醋,筛选曲霉菌我应该更在行。”

“公子,郑姬也想试试这个。”

“好,白冰,郑姬,你们带着他们两三个人把这个事情做好。”

“当然,还有第三个任务,你们在培养曲霉的时候,有可能会得到一种青霉的菌种,这种青霉多见于水果霉变,比如说橘子,橘子霉变之时会产生白色霉菌,但是随着菌丝的生长,会变成青色,那个颜色的菌丝我需要的青霉菌。”

“当然,剩饭剩菜等等也可以用来霉变生菌,也有青霉。我告诉你们,一旦得到青霉菌马上用玻璃碟做成培养基,培养基的营养液最开始可以采用用米磨成糊加上山药磨成的糊作为培养基溶液。这个阶段不为别的,就是为了大量繁殖青霉菌。”

“等得到了纯净的,颜色纯正,不含杂菌的青霉菌之后,就要用葡萄糖,植物油,水混合做搅拌,然后抽出水,植物油和葡萄糖的混合液,这就是精制培养液了。”

“此时将青霉菌培养液用蒸馏水稀释再用细布或者丝绸过滤置于培养液中,培育其生长,这个过程大概一代要七天,经过一代一代的培养,最后得到较好的菌株,此时青霉菌才能真正的有大用途。”

“此外,咱们还要专门做一些木柜,用酒精严格消毒,将需要培养的细菌培养基放在里边,存放培养基的房间也要消毒,保证空间内洁净无菌。”

“先生,熊商不解,这青霉菌到底有何用途,能生产何种产物,让先生如此费力的培养?”

看着周围一脸不解的一众学生和众人。

“你们都很好奇,我要这个青霉菌干啥?其实青霉菌与培养基的发酵产物叫做青霉素,而青霉素的唯一作用就是抑制其他细菌的生长,并且逐渐杀灭其它细菌。记住,这种抑制和杀灭是在不损伤人体的情况下进行的。”

“这里我要再说一个概念,细菌和咱们人,都同时存在与这个世界。前边咱们说了,细菌有好有坏,好的细菌咱们可以用来做很多事,比如说酿酒酿醋等等,但不好的就可以致病。”

“比如说瘟疫,鼠疫,伤寒,拉肚子,伤风,外伤感染化脓最后导致血液腐坏,人的生病发烧其实都是致病细菌在人体内造成破坏。”

“但是如果有了青霉菌,则可以通过发酵生产青霉素,然后将青霉素提纯,与葡萄糖,盐水等混合以静脉注射的方式注入人体。那么青霉素就可以去抑制并且杀死那些有害的细菌,从而治愈肺痨,疟疾,瘟疫,鼠疫,霍乱,伤寒等等一系列因为有害病菌引起的疾病。”

“所以,青霉素有另外一个名字,叫做疗伤圣药。我叫它广谱抗生素,一旦咱们找到合适的菌株,并且可以大量生产。它将帮助咱们大大加强抵抗细菌性感染的能力,它的出现可以开创了用抗生素治疗疾病的新纪元。”

“我还可以将其完善,做成青霉素针剂和口服青霉素分别治疗肺炎、脑膜炎、心内膜炎、白喉、炭疽等病。总之只要和细菌感染有关,都能用到它。”

“廖姜,郑姬,你们的师叔扁鹊不是可以给人外伤手术吗?如果有了青霉素的帮助,手术的成功率将得到极大的增加。尤其是术后感染的风险,将大幅度下降。尤其是通过手术,去除留在人身体的箭矢,异物等等,都有极大的帮助。”

“那么继青霉素之后,咱们还可以开发链霉素、氯霉素、土霉素、四环素,头孢菌素等抗生素,增强医师治疗传染性疾病的能力。甚至消灭传染病,你们想想它有多厉害吧。”

“先生,这。。。。。。。”

“大哥。。。。。。。”

“公子。。。。。。。”

“公子。。。。。。。。。”

“兄弟,你知道不知道你在说什么?肺痨,疟疾,霍乱,伤寒,瘟疫。这些,这青霉素都能治。”

“我可以负责的告诉你们,能治,在准确一点那就是只要造出青霉素,就一定能治。有了青霉素,我们可以让战场上身负重伤的士兵起死回生,可以让受伤的士兵加速回复。”

“可以让所谓的一些不治之症治愈,这都需要咱们对青霉菌进行培养,繁殖,优选,最后得到更好的青霉素。再将青霉素提纯浓缩,纯度越高,青霉素的抗菌灭菌效果就越好。”

“公子,既然如此苏秦也愿加入其中,全力以赴,需要做什么公子吩咐便是。”

看着众人信任的眼神和跃跃欲试的表情,雷云想了想,然后郑重的说道。

“其实很多你们想不到的事情,解决不了的问题,工学都可以很好的解决其实很多东西就存在与咱们平常的生活之中,比如说腐败的食物,水果能产生青霉菌。”

“但是这是一条很艰难的路,他需要人付出大量的时间和精力,去一代一代的发展选育菌株。我只能告诉你们方法,下来如何走,关键看你们的耐心和毅力。”

“其实制取青霉素并不复杂,前边说了一旦得到不同的好的菌株,在营养液中培养出来菌体孢子,便将将炭磨成粉末,加入精制培养液,让炭粉吸收青霉素。

“再将吸收了青霉素的炭放在分离管柱之类的容器内,以蒸馏水及酸性水洗净,然后用碱性水冲洗。”

“那么分划出来的青霉素便会被分划在某个部分,浓缩再溶解出来,这就是分离管柱色层分离法。然后以琼脂培养基去培养葡萄球菌等一些有害菌,进行药剂感受性测试,就可以将效果显着的分划判断出来。”

“然后全力培养功效最好的菌株孢子,一代一代的繁育,青霉素的效果就会越来越好。为了得到抑菌效果,杀菌效果最好的菌株孢子,就必须广泛的采集青霉菌,要在不同的地方,不同的环境中让培养物霉变,在提取菌株培养。”

“因此,咱们可能要踏遍诸国,这个我希望你们准备好。”

“大哥,我记下了,将米磨糊加上以山药磨成的糊,植入青霉培养7天。将培养液用细布绸缎过滤,过滤后的加入培养液培养,一直到菌株孢子消耗完培养液吗?下来怎么做?”

“对,等青霉菌消耗营养液差不多了,加入植物油来溶解脂容性物质,由于青霉素是水溶性的所以油下面的水溶解了青霉素。将水加入放了煮过消毒过的活性炭的容器并搅拌。再将将这些活性炭放入分离管就是上端开口大,下端开小口的那种。”

“用蒸馏水清洗,然后注入酸性水就是有醋酸的水,最后用碱性水注入。这时候在下方出口处加上细布以减小流速。从伤患者身上取得葡萄球菌用培养基培养。”

“再将不同的划分涂在葡萄球菌培养皿上。几天后如果葡萄球菌只在所涂的青霉素周围生长,那么这份划分便算有药效。再根据培养基的葡萄球菌抑制生长的距离,判定哪一种青霉产生的青霉素药效好,比如说,一种青霉素周围的葡萄球菌一寸无法生长,另一种是两寸,则两寸的肯定好一些。”

“当然,在条件完全一样的情况下,不光是距离,还有葡萄球菌的生长情况,这个只要到时候比较一下便知道了。”

“懂了大哥,放心把大哥,我们一定把这件事情做成了。”

“先生放心,我们一定把这件事做成,做好。”

雷云看着众人,其实现在自己不知不觉之间,已经把这些人带到了生物制药的领域了。其实青霉素生产可分为菌种发酵和提取精制两个步骤。第一步是菌种发酵,将产黄青霉菌接种到固体培养基上,在25℃下培养7~10天,即可得青霉菌孢子培养物。

用无菌水将孢子制成悬浮液接种到种子罐内已灭菌的培养基中,通入无菌空气、搅拌,在27℃下培养24~28h,然后将种子培养液接种到发酵罐已灭菌的含有苯乙酸前体的培养基中,通入无菌空气,搅拌,在27℃下培养7天。在发酵过程中需补入苯乙酸前体及适量的培养基。

第二步是提取精制,将青霉素发酵液冷却,过滤。滤液在pH2~2.5的条件下,于萃取机内用醋酸丁酯进行多级逆流萃取,得到丁酯萃取液,转入pH7.0~7.2的缓冲液中,然后再转入丁酯中,将此丁酯萃取液经活性炭脱色,加入成盐剂,经共沸蒸馏即可得青霉素G钾盐。青霉素G钠盐是将青霉素G钾盐通过离子交换树脂而制得。

当然,还有合成法。以氨基青霉烷酸为中间体与多种化学合成有机酸进行酰化反应,可制得各种类型的半合成青霉素。

就是用氨基青霉烷酸是利用微生物产生的青霉素酰化酶裂解青霉素而得到。酶反应一般在40~50℃、pH8~10的条件下进行;酶固相化技术已应用于氨基青霉烷酸生产,简化了裂解工艺过程。氨基青霉烷酸也可从青霉素G用化学法来裂解制得,但成本较高。

侧链的引入系将相应的有机酸先用氯化剂制成酰氯,然后根据酰氯的稳定性在水或有机溶剂中,以无机或有机碱为缩合剂,与氨基青霉烷酸进行酰化反应。缩合反应也可以在裂解液中直接进行而不需分离出氨基青霉烷酸。

但是这都无一例外的需要设备,需要现代化的设备。不锈钢啊,现在高阙的钢产量太低了,必须获得足够的镍,铬才能生产足够的不锈钢来做成各种耐腐蚀,无杂物的设备。

生物制药不需要和煤化工,石油化工一样,需要能抵抗很大压力和高温的容器。但是对容器内部要求很高,铁器和钢制器材总生锈这是不行的,必须用不锈钢来制作,可雷云一想起这事就头疼。

两座新城要建设,屈曼需要防御,高阙产出的钢既要满足军备器械,又要满足建设用钢,而要大批量生产钢材,首先既要人,其次就是要造出炼钢的设备,高炉,转炉,钢材传送带,轧钢机,拉线机,穿孔机等等

只有造出这些设备,才能造出螺纹钢,线材,钢板,无缝钢管,但这一套设备自身就要消耗大量钢材。至于双梁吊,单梁吊现在雷云也只能想想。

“大哥,大哥。。。。”

“哦哦哦没事,有点跑神了。你刚才说什么?”

“大哥,我是问你,选择了较好的菌株做种以后,如何再次进行优选培育?”

“哦哦哦,是这样,咱们把自然取得的青霉菌叫做野生型菌,咱们培养繁育的叫做突变型青霉菌。这个可以利用青霉素特异性地杀死野生型细胞、保留营养缺陷型细胞的方法。青霉素能抑制细菌细胞壁的合成,所以只能杀死生长繁殖中的细菌,而不能杀死停止分裂的细菌。”

“在只能使野生型生长而不能使突变型生长的选择性液体培养基中,野生型被青霉素杀死,而突变型则不被杀死,从而淘汰野生型,使突变型得以浓缩。是筛选的常用方法。简单说就是用它自己,杀死自己的同类。然后让突变型越来越接近咱们想要的生产高效青霉素的菌种。”

“甚至还可以加入适当比例的酒精,杀死弱的,留下强的,然后在培养,在提高酒精浓度,在杀死弱的留下强的,一直到获得最好的菌种为止。”

“当然,这个也要根据实际情况,比如说,现在产出的青霉素已经够用了,疗效很好,就没有必要生产更好的,但是作为研发储备,菌种研究出来最后暂时保留,不做生产,一直到市场上用的疗效不佳了,在拿出来生产。”

“为何?大哥既然这青霉素非常管用那为何大哥会说它会逐渐的疗效不佳了?”

“因为抗性,青霉素的使用,或者说抗生素的使用固然效果奇佳,但是用过的人随着使用次数的增多,便会产生抗性或者说耐药性。”

“此时正在使用的这一代的青霉素就会逐渐失去作用,因为它主要是消灭有害细菌的,但是有害细菌也会进化,变异来抵抗。所以找出青霉素是一条路,但是后边不断的升级培养新的青霉菌也不能停止。”

“一旦一代失效,另一代更好的必须投入市场,这就像一场竞赛,一旦开始就不能停下来。”

“并且,在所有人当中,有一些对青霉素过敏,这类人数量很少,一千人,一万人中可能会有一两个,但是这样的人,只要使用青霉素,马上就会死。所以,针对安全的使用青霉素,还有一套验证手段,方法就是先把一点点青霉素注射到人的皮下。”

“如果有过敏反应,就会红肿,发痒,其疹子等等的表现,那么这人就不能使用青霉素,只能用其他的抗生素代替,比如说链霉素、氯霉素、土霉素、四环素,头孢菌素等等,当然,咱们老祖宗的重要也很不错,但是也需要将植物中的有效成分提取出来,浓缩,精炼提纯。这样疗效才更高,更好。”

其实其实说实话雷云也很矛盾,这也是西药的一个最大弊端,而中药则完全没有这个很大的副作用,后世有很多人对中医可以说是极尽的苟且,但是实话说,中医保护了中华民族5000年!中医呵护下,中华历史上从未出现过长时期的传染病。

而欧洲历史上却出现过猖獗了3个世纪的鼠疫,由于西医的无能,在长达3个世纪里大面积的欧洲人死亡有些种族甚至被灭绝了。而在中国,即便在非典猖獗的时期,由于中医的诊治与防治,及时的控制了非典在中国的蔓延,并且,大多数中国人在当时都是喝中药预防的。

而后来的新冠疫情更是让很多中成药成为了再无药可用的情况下的综合用药手段,而疫情下也证明了中药的疗效是可靠的。

中医功高盖世,这句话不过分。美国人忌讳中医的安全、有效、廉价。影响西医竞争力,对中医实现西化。

在1927年美国的注明财阀,被称为慈善家、资本家的,约翰·洛克菲勒。就曾经明目张胆的说要向让西医进入亚洲市场,让西药获得更高的利润,就必须消灭中医。

因为中医和中药足够廉价,加上当时的中国军阀割据,民不聊生,传统的东西纷纷被认为无用不足以救国,于是大家纷纷的学习西方,当然,这里边就有儒家。

但是很不幸,中医也被当成了废物被中国的国人自己扔进了垃圾桶。而事实上,东汉末年,中国人口数量发生了骤减。

在东汉国力鼎盛时期的永元之隆,中国人口则达到了5000多万,随后中国人口到东汉末年黄巾起义前达到了顶峰6000多万人,但之后中国进入乱世,平叛、军阀割据、天下三分再到西晋统一时,仅过了100年左右,但中国人口则下降至1000多万。

很多人都认为这段时期中国人口的下降是因为战争,但实际上,因为战争直接死亡的人数在整个人口损失的占比中并不算多,真正的罪魁祸首是瘟疫,而战争则是瘟疫爆发和蔓延的催化剂,着名的建安七子中有四人因瘟疫在同一年去世。

汉末大瘟疫是中国历史上规模最大的瘟疫,蔓延了大半个中国,尤其是北方基本上都生活在疫情的阴影之下。归结原因一是战乱,再者就是缺医少药。

关于瘟疫造成的死亡人数,有记载和统计在一千万到三千万不等,虽然至今没有一个统一的说法,但是死亡人数上千万这一点没有什么可质疑的。

在这以后,中国也爆发过大瘟疫,但再也没有发生过死亡人数上千万的瘟疫,有记载的是明末大鼠疫,但其伤亡和危害程度也远不及汉末大瘟疫,因为中国人此时已经有药可用了,而这一切的功劳则要归功于一位被汉末瘟疫逼出来的汉末医圣,张仲景。

张仲景的传世巨着《伤寒杂病论》是中医的精髓所在,也是中医临床的基本原则,是中国第一部从理论到实践、确立辨证论治法则的医学专着,在海外也有相当大的影响。古人云:不明《伤寒论》者不可以为医。

后人的着名医书,如晋代太医王叔的《伤寒论》以及宋代的《金匮要略》都是以张仲景的《伤寒杂病论》为基础编撰,而除了《伤寒杂病论》,张仲景还有《辨伤寒》十卷,《评病药方》一卷,《疗妇人方》二卷,《五藏论》一卷,《口齿论》一卷,只可惜这些都早已失传。

但是仅凭现存的这些张仲景的着作,后世的人们已经能清晰的了解到各种瘟疫的不同,以及适合各种个症状的组方,并且这些组方广为流传。只要是个江湖郎中都知道一些,这给自汉末之后的中国在大灾,大疫出现之后迅速的采取有效的手段防止疫情扩散起到了关键作用。

但是中医作为国之瑰宝,不仅仅被西医药排挤,也被自家人算计,看看后市的医院,一个感冒就能动则几千元的医药费,巨大的利益驱使,让几乎所有的医生在用药时,绝大多数都选择了,西药,而不是中药。

甚至后世的医学院,西医学院门庭若市,中医学院门可罗雀。一些公知,精英整天叫嚣中医病理不通,西医病理明确。中医就是跳大神,大有把自己的中医除之而后快的干劲。

结果就是西医学会有钱赚,中医学会了自己都养活不了自己。学习者越来越少,精研者则更少,加上一些利欲熏心的人,以中医为幌子,整天招摇撞骗,结果导致中医的处境更是雪上加霜,若是情况继续,相信后世要不了多久,中医便会永绝与世。

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